固定（1）小塊組織固定法：這是常用的方法，從人體或動物體取下的小塊組織，須立即置入液態(tài)固定劑中進(jìn)行固定，通常，標(biāo)本與固定液的比例為1:4～20，但組織塊不宜過大過厚，否則固定液不能迅速滲透。故取組織塊的大小一般為2.0cm×2.0cm×0.3cm。（2）注射、灌注固定法：某些組織塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部，或需要對整個臟器或整個動物體進(jìn)行固定。這時宜采用注射固定或灌注固定法。將固定液注入血管，經(jīng)血管分支到達(dá)整個組織和全身，從而得到充分的固定。（3）蒸汽固定法：比較小而厚的標(biāo)本，可采用鋨酸或甲醛蒸汽固定法。如涂片，則應(yīng)在血片未干燥前采用鋨酸或甲醛蒸汽接觸固定。常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。染色蘇木素染色時間要根據(jù)染料的新舊、溫度、切片的類型而定，一般為5－15分鐘。經(jīng)水略洗后，用鹽酸酒精分化，分化程度必須用顯微鏡控制。分化水洗后，可用溫水或自來水藍(lán)化，并充分水洗（流水沖洗5分鐘以上），以防鹽酸殘留導(dǎo)致切片褪色。我們不提倡使用堿性溶液（釋氨水、肥皂水等）促藍(lán)，盡管藍(lán)化效果很好，但從實踐的結(jié)果來看，用堿性溶液促藍(lán)的切片不能長期保存，容易褪色。后入伊紅復(fù)染（5－20秒）。HE染色的關(guān)鍵在于深淺適度，對比鮮明，一般有經(jīng)驗的，肉眼就能判斷，但偶而也會出現(xiàn)失誤，所以用顯微鏡控制是保險的方法。其關(guān)鍵的步驟在于蘇木素染好后的分化及藍(lán)化過程，在藍(lán)化結(jié)束后，應(yīng)在顯微鏡下觀察細(xì)胞核著色合適，核結(jié)構(gòu)清晰，胞漿內(nèi)有殘留的蘇木素等等。染色理想的切片在顯微鏡下應(yīng)是：細(xì)胞核與細(xì)胞漿應(yīng)藍(lán)紅相映，鮮艷美麗；核漿對比明顯，核膜及核染色質(zhì)顆粒清晰可見展片與撈片展片水溫應(yīng)在42℃至47℃之間，這主要和包埋蠟的熔點有關(guān),水溫過高，會引起組織細(xì)胞散開，水溫過低，切片皺摺無法攤平。包埋蠟中如有二甲苯，也會造成石蠟溶解現(xiàn)象。而用一次性刀片切的片子，一碰到熱水，片子上的皺摺就無法再展開，這有二個方法可以解決：、可以在切片時邊切邊向蠟片吹氣，這樣的片子就會非常平整，放到熱水里就會自然展開，比較方便快捷，但這樣的片子會略微厚一點；第二、在切完片子后，先把切片放在30%酒精水溶液中，讓酒精的張力自動把皺摺展開，然后再將切片移到熱水，這樣的片子會較薄;如酒精濃度過高，容易引起切片破碎，出現(xiàn)裂隙，像脂肪之類細(xì)胞間粘附性較小的組織一碰到酒精就會散開，故不能用此法。后撈片時玻片要干凈，要選擇那些完整、無皺摺的切片，粘貼于玻片中1/3和下1/3的中間。