產(chǎn)品簡(jiǎn)稱：MOVAS-1

　　中文名稱：小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

　　細(xì)胞數(shù)量：1*10^6

　　組織來(lái)源：成年C57BL/6小鼠，心，主動(dòng)脈，平滑肌

　　形態(tài)特征：紡錘形

　　生長(zhǎng)方式：貼壁生長(zhǎng)

　　背景描述：1999年12月用膠原酶-彈性蛋白酶消化法分離的原代血管平滑肌細(xì)胞，用SV40大T抗原和新霉素耐藥基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒進(jìn)行了轉(zhuǎn)染。在0.4mg/mlG418存在下選擇克隆并通過(guò)限制稀釋進(jìn)行亞克隆。

　　培養(yǎng)條件：DMEM高糖，10%胎牛血清，丙酮酸鈉；空氣95%，二氧化碳5%；37℃培養(yǎng)

　　換液頻：率2-3天

　　傳代比例：1:5-1:8

　　凍存液配方：95%完全培養(yǎng)基，5%DMSO

　　安全性：BSL-1

　　供應(yīng)限制：僅供科研

　　運(yùn)輸方式：常溫運(yùn)輸（T25培養(yǎng)瓶）

　　細(xì)胞培養(yǎng)方法:

　　1、小鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞規(guī)格細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

　　①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

　?、诩尤?ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

　?、?-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

　?、軐⒓?xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

　　⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

　?、迲腋〖?xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

　　2、細(xì)胞復(fù)蘇:

　?、賹龃婀茉?7℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

　?、谠?000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

　　3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

　?、贄壢ヅ囵B(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)

　?、?-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;

　?、蹖⒓?xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;

　　④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。